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色谱柱选择步骤

发布日期:2021-09-09 20:12 来源:网络 作者:沃特世 浏览次数:

3个步骤:

  • 根据对分离的要求选择合适的分离系统,应用对应的色谱柱体系(UPLC、UHPLC、HPLC);

  • 选择合适的色谱柱填料的颗粒;

  • 选择合适的键合相。

    图1. 色谱柱选择步骤

     

    01

     选择合适的仪器系统 

    分离是离不开仪器硬件设备的,基于对分离度、效率的要求,可以选择不同的平台,应用不同尺寸的颗粒填料来进行分析。例如:对于OLED行业红光掺杂剂的杂质分析,当色谱柱颗粒填料从3.5 μm(HPLC系统)降到2.5 μm(UHPLC系统)时,原来区分不明显的2个主要组分,则可以更明显地被区分开来,此外看到的杂质数量也显著增加

    图2. HPLC(3.5 μm)和UHPLC(2.5 μm)分离一种OLED红光掺杂剂的色谱图。

    图3. UHPLC在高浓度杂质表征中看到更多信息。

    02

     选择色谱柱的颗粒类型 

    不同的基础填料具有不同的分离性能,沃特世有四大填料平台,每种填料种类都有对应的HPLC-UHPLC-UPLC的色谱柱,实验人员可以根据实际仪器的情况进行选择。

    图4. Waters BEH、HSS、CSH和CORTECS平台

    • BEH亚乙基桥杂化颗粒:典型特点是在硅胶基质中嵌入亚乙基桥的结构,这就使得它们的机械强度增加,具有宽的PH稳定性,是最常用的色谱柱系列;

    • HSS高强度硅胶:不同选择性,更高保留性;

    • CSH:表面带电杂化颗粒填料,碱性化合物分析优选;

    • CORTECS:实心颗粒,更高柱效和更大的分离度,优化色谱柱背压;

     

    03

     选择填料的键合相 

    最后,再基于待测化合物的类型,选择相应的色谱柱键合相。简单来说,就是基于极性和相似相溶的反相液相色谱分离原理,我们期望键合相对待测的化合物具有更好的亲和性和保留性,以达到分离的目的。

    图5. 不同颗粒填料的键合相结构

    几种常用的化工行业键合相介绍:

    • C18:通用型色谱柱,方法开发最佳选择,随仪器常规标配;

    • Phenyl:苯基柱,对芳香族化合物具有独特的选择性,当分离目标还具有胺基或羧基官能团时,可利用不同pH条件下的选择性提高载量和分离度,是很多化工行业必备柱之一;

    • Amide:可增加强极性化合物的保留,达到更好的分离效果;

    • T3:极性化合物分析专用柱,增强极性化合物保留,减弱疏水性化合物保留,与100%水相兼容。

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