色谱柱选择步骤

发布日期：2021-09-09 20:12 来源：网络作者：沃特世浏览次数：

3个步骤：

根据对分离的要求选择合适的分离系统，应用对应的色谱柱体系(UPLC、UHPLC、HPLC)；
选择合适的色谱柱填料的颗粒；
选择合适的键合相。

图1. 色谱柱选择步骤

01

选择合适的仪器系统

分离是离不开仪器硬件设备的，基于对分离度、效率的要求，可以选择不同的平台，应用不同尺寸的颗粒填料来进行分析。例如：对于OLED行业红光掺杂剂的杂质分析，当色谱柱颗粒填料从3.5 μm(HPLC系统)降到2.5 μm(UHPLC系统)时，原来区分不明显的2个主要组分，则可以更明显地被区分开来，此外看到的杂质数量也显著增加。

图2. HPLC(3.5 μm)和UHPLC(2.5 μm)分离一种OLED红光掺杂剂的色谱图。

图3. UHPLC在高浓度杂质表征中看到更多信息。
02

选择色谱柱的颗粒类型
不同的基础填料具有不同的分离性能，沃特世有四大填料平台，每种填料种类都有对应的HPLC-UHPLC-UPLC的色谱柱，实验人员可以根据实际仪器的情况进行选择。

图4. Waters BEH、HSS、CSH和CORTECS平台
- BEH亚乙基桥杂化颗粒：典型特点是在硅胶基质中嵌入亚乙基桥的结构，这就使得它们的机械强度增加，具有宽的PH稳定性，是最常用的色谱柱系列；
- HSS高强度硅胶：不同选择性，更高保留性；
- CSH：表面带电杂化颗粒填料，碱性化合物分析优选；
- CORTECS：实心颗粒，更高柱效和更大的分离度，优化色谱柱背压；
03

选择填料的键合相

最后，再基于待测化合物的类型，选择相应的色谱柱键合相。简单来说，就是基于极性和相似相溶的反相液相色谱分离原理，我们期望键合相对待测的化合物具有更好的亲和性和保留性，以达到分离的目的。

图5. 不同颗粒填料的键合相结构
几种常用的化工行业键合相介绍：
C18：通用型色谱柱，方法开发最佳选择，随仪器常规标配；

Phenyl：苯基柱，对芳香族化合物具有独特的选择性，当分离目标还具有胺基或羧基官能团时，可利用不同pH条件下的选择性提高载量和分离度，是很多化工行业必备柱之一；

Amide：可增加强极性化合物的保留，达到更好的分离效果；

T3：极性化合物分析专用柱，增强极性化合物保留，减弱疏水性化合物保留，与100%水相兼容。