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液相色谱柱的选择、维护与使用

发布日期:2021-02-20 21:23 来源:研究小组 作者:AgroIPM 浏览次数:
液相色谱柱的功能主要由填料实现,填料的性能直接决定了色谱柱的应用范围和性能。 
目前采用的填料主要为球形填料,通过四乙氧基硅烷(Tetraethoxysilane,简称TEOS)合成制备出不同规格的多孔硅胶基质。
填料表面孔径的大小决定了其对不同分子量物质的选择程度,孔径小适合于小分子量物质的分析,孔径大适合大分子量物质的分析。
 

被测物分子量(MW) <3,000 3,000-10,000 >10,000 非常大
推荐使用的填料孔径 60-130Å(6-13nm) 125-200Å(12.5-20nm) 300-1,000Å(30-100nm) 无孔填料
 
通过向硅胶孔径表面(硅羟基)修饰(键合)不同的功能基团(C8、C8、NH2等)进一步拓展填料性能,这是因为99%的色谱分离在内孔表面进行。未进行功能基团修饰(键合)的硅羟基可键合上三甲基硅烷进行端基封口处理,减少硅羟基的影响,如减少不可逆吸附或拖尾,并能增加碳含量。含碳量越高,k’越大(固定相传质将就增加)。高含碳量硅胶基水解稳定性好、重现性好,并有利于不易保留化合物的分离,有利于改善极性化合物的拖尾。低含碳量则有利于分析中性及碱性化合物、降低溶剂损耗。
填料的pH稳定性:硅胶填料pH : 2-8,聚合物填料pH : 2-12,杂化硅胶填料pH : 2-12。pH 值小于2时键合相水解(酸解),pH值大于8时硅胶溶解。
向硅胶颗粒内孔引入硅甲基制备出稳定性好的第一代杂化颗粒,引入亚乙基桥(BEH)制备出第二代杂化颗粒(XBridge)
Waters主流色谱柱及其特点:

 
XBridge BEH:通过极性嵌入基团保留水,可完全兼容100%水相,屏蔽硅醇基,对碱性化合物峰形更佳,提供与C18不同的选择性,pH 1-12。与ACQUITY® BEH色谱柱的差别仅在于填料粒径不同。
XBridge HILIC:提供与反相互补的分离选择,如下图:

Atlantis T3色谱柱:在增强极性化合物保留能力的同时, 维持了对中等和强疏水化合物的适度保留能力,耐受100%水相流动相。T3采用三官能团键合技术,低配基密度C18烷基链键合封端技术,对dC18色谱柱的稳定性进行了更好的提升。能够很好地分离和纯化极性物质。
Atlantis HILC色谱柱:可用于保留反相条件下无法保留的强极性有机分子 。采用高有机含量流动相实现良好的分离,可以通过加快所收集馏分的蒸发速度,实现更低粘度、更低反压的分离,制备中有助于提高效率。


色谱柱使用:新色谱柱先测定柱效,并在使用中定期检测柱效。所有测定结果应保留备查,定期检测仪器谱带展宽。
反相色谱柱清洗程序:


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