液相色谱柱的选择、维护与使用

发布日期：2021-02-20 21:23 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

液相色谱柱的功能主要由填料实现，填料的性能直接决定了色谱柱的应用范围和性能。
目前采用的填料主要为球形填料，通过四乙氧基硅烷（Tetraethoxysilane，简称TEOS）合成制备出不同规格的多孔硅胶基质。
填料表面孔径的大小决定了其对不同分子量物质的选择程度，孔径小适合于小分子量物质的分析，孔径大适合大分子量物质的分析。

被测物分子量（MW)	<3,000	3,000-10,000	>10,000	非常大
推荐使用的填料孔径	60-130Å(6-13nm)	125-200Å(12.5-20nm)	300-1,000Å(30-100nm)	无孔填料

通过向硅胶孔径表面（硅羟基）修饰（键合）不同的功能基团（C8、C8、NH2等）进一步拓展填料性能，这是因为99%的色谱分离在内孔表面进行。未进行功能基团修饰（键合）的硅羟基可键合上三甲基硅烷进行端基封口处理，减少硅羟基的影响，如减少不可逆吸附或拖尾，并能增加碳含量。含碳量越高，k’越大（固定相传质将就增加）。高含碳量硅胶基水解稳定性好、重现性好，并有利于不易保留化合物的分离，有利于改善极性化合物的拖尾。低含碳量则有利于分析中性及碱性化合物、降低溶剂损耗。
填料的pH稳定性：硅胶填料pH : 2-8，聚合物填料pH : 2-12，杂化硅胶填料pH : 2-12。pH 值小于2时键合相水解（酸解），pH值大于8时硅胶溶解。
向硅胶颗粒内孔引入硅甲基制备出稳定性好的第一代杂化颗粒，引入亚乙基桥（BEH）制备出第二代杂化颗粒（XBridge）。
Waters主流色谱柱及其特点：

XBridge BEH：通过极性嵌入基团保留水，可完全兼容100%水相，屏蔽硅醇基，对碱性化合物峰形更佳，提供与C18不同的选择性，pH 1-12。与ACQUITY® BEH色谱柱的差别仅在于填料粒径不同。
XBridge HILIC：提供与反相互补的分离选择，如下图：

Atlantis T3色谱柱：在增强极性化合物保留能力的同时，维持了对中等和强疏水化合物的适度保留能力，耐受100%水相流动相。T3采用三官能团键合技术，低配基密度C18烷基链键合封端技术，对dC18色谱柱的稳定性进行了更好的提升。能够很好地分离和纯化极性物质。
Atlantis HILC色谱柱：可用于保留反相条件下无法保留的强极性有机分子。采用高有机含量流动相实现良好的分离，可以通过加快所收集馏分的蒸发速度，实现更低粘度、更低反压的分离，制备中有助于提高效率。

色谱柱使用：新色谱柱先测定柱效，并在使用中定期检测柱效。所有测定结果应保留备查，定期检测仪器谱带展宽。
反相色谱柱清洗程序：