高氏1号培养基的制备

发布日期：2020-11-16 11:15 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

一、目的要求
　　通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。

二、基本原理
　　高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源），KNO3（作为氮源），NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O（作为无机盐，为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子）和FeSO4·7H2O（作为微生物的微量元素，提供铁离子）等组成。由于磷酸盐和镁盐相混合时产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分。对于如FeSO4·7H2O这样的微量成分，则可预先配成高浓度的贮备液，在配制培养基时按需要加入一定的量。
　　高氏1号培养基配方如下：
　　可溶性淀粉 20g
　　NaCl 0.5g
　　KNO3 1g
　　K2HPO4·3H2O 0.5g
　　MgSO4·7H2O 0.5g
　　FeSO4·7H2O 0.01g
　　琼脂 15-20g
　　水 1000ml
　　pH 7.4-7.6

三、器材
　　可溶性淀粉，KNO3 ，NaCl，K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2 O， FeSO4·7H2O，琼脂， 1mol/L NaOH， 1mol/ LHCl；
　　试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5-9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤
　　1．称量和溶化
　　按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。再称取其他各成分依次逐一溶化。对微量成分FeSO4 ·7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在100ml水中加入1g的FeSO4·7H2O配成0.01g/ml，再在1000ml培养基中加入1ml的0.01g/ml的贮备液即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基，加入琼脂后需要煮沸溶解再加入盐，防止盐在加热过程中发生化学反应。
　　2．pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查。

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