高压液相制备的几点注意事项

发布日期：2019-11-10 21:44 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

1.样品分析
　　充分了解化合物的理化性质，包括在流动相（甲醇、乙腈、水）中的溶解情况，在酸碱体系中的稳定性，特征吸收光谱。注意分析样品成分的复杂程度，其中是否含有强酸、强碱化合物。

2.建立样品的HPLC分析方法
　　方法建立过程中着重关注待分离的目标化合物，使该物质与前、后组分尽可能分离开，分离越充分越有利制备放大。若流动相中需要添加改性剂（调节酸、碱、离子强度等），应尽量采用挥发性的缓冲盐，优先考虑如甲酸、乙酸、三氟乙酸、甲酸铵、乙酸铵、三乙胺、氨水等，否则后期需要进行脱盐处理。

3.放大制备
　　在HPLC分析方法的基础上采用系统软件进行参数放大，先试进样考察分析结果的重现程度，再开展正式制备。可考虑加大进样量以提高效率，出现平头峰没关系，能快速收集到目标产物是关键。

4.样品的溶解
　　制备中需要较高的样品浓度，样品尽量溶解在初始洗脱溶剂中，尽量使用乙腈作为流动相，能够有效减少溶剂吸收的影响。

5.流动相开发
　　一般使用90%的乙腈或甲醇测试，尽快得到分离结果，再根据出峰情况调整流动相。
　　每减少10%有机溶剂用量，保留因子增加约3倍。
　　分离达到一定程度，应将有机溶剂改变量调整到5%。

6.目标化合物的获取
　　先低温旋蒸掉乙腈（甲醇）后，再溶剂萃取或者沉淀出目标化合物。热稳定性好的化合物可以直接旋蒸干水，或者用油泵拉干。抽取量少的情况采用冷冻干燥是比较有效的处理方法。要关注浓缩过程中烧瓶中的收集液酸碱性变化对目标化合物的影响。

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