细菌冷冻真空干燥保存法

发布日期：2017-07-08 11:50 来源：研究小组作者：admin 浏览次数：

该法是目前保存菌种的最佳方法，具有如下几个突出的优点：

①适用范围广。除少数不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用此方法保藏外，其他各大类微生物如细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及病毒均可采用此方法保藏；

②保藏期长，成活率高。有人报道保藏在真空冷冻干燥安培管中的真菌成活期长达40多年，一般微生物至少可保存10余年；

③微生物在保藏期内可避免其它杂菌污染；
④便于携带运输，易实现商品化生产。

其缺点为需要一定的设备（冷冻真空干燥机）、操作繁琐等。菌种管由传统的玻璃菌种管改为0.5ml带盖塑料离心管（也可采用专用的冻存管）。

方法：

①将塑料离心管置耐高压塑料离心管盒内并用双层报纸包好，高压蒸汽15磅15min消毒，放烘箱80℃烘干水蒸汽。

②在净化工作台内用脱脂牛奶洗下浓菌悬液，再用滴管加到离心管底部，每只0.2ml左右，切记不要将牛奶接触离心管口。

③将加好菌液的离心管盒置-20℃冰箱预冻（也可超低温速冻），预冻好后把离心管盒放置到冷冻干燥机冻干。

④冻干后的离心管在净化工作台内压紧管盖。贴标签，再用封口膜（parafilm）封紧管口。放-20℃或更低温冰箱保存。

脱脂牛奶灭菌：购买袋装或盒装的超高温灭菌优质脱脂牛奶直接使用，或在115℃处理25min高压蒸汽灭菌。

其它保存方法：

细菌的滤纸片保藏法