菌种滤纸片保藏法

发布日期：2017-07-08 11:24 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

一、无菌滤纸片的准备

用打孔器将滤纸制成直径约3mm的圆形小纸片（以能够方便操作为宜），121°C高压蒸气灭菌30 min后备用。

二、菌种的准备

将需要保存的菌种在适宜的斜面培养基或平板培养基上复苏培养，取处于生长旺盛（对数生长期）的菌体供保存。

三、菌种保存
（一）抽真空方法

（1）取灭菌脱脂牛乳1-1.5 mL滴加在灭过菌的EP离心管(1.5 mL），挑取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。

（2）用灭菌镊子夹取无菌滤纸片浸入菌悬液内，使其自然吸附饱和菌液后取出放入灭过菌的EP离心管内，每管至少放置10片，然后盖上瓶盖（注意留有小缝隙，不要盖紧）。

（3）在离心管外壁上注明菌种编号、种类、名称、保存时间等信息。

（4）将离心管放置在冷冻干燥器中抽真空冻干。

（5）冻干管用Pafafilm封好口，放置于-20°C及以下低温冰箱冷冻保存。

上述滤纸片保存法需要抽真空，如果实验室不具备抽真空的条件，用如下方法。

（二）无需抽真空方法

（1）用无菌小镊子夹住滤纸片，每片在细菌平板上刮取菌苔，或至少刮取3-5个单菌落，然后将滤纸片放入菌种保存管内，每瓶至少放置10片，然后直接盖紧瓶盖。

（2）在玻璃瓶外壁上注明菌种编号、种类、名称、保存时间等信息。

（3）将干燥后的装有菌片的玻璃瓶放置于-20°C及以下低温冰箱冷冻保存。

四、菌种复苏
需要复苏使用菌种时，从冰箱中取出保存管，用75%乙醇擦拭管口，揭开封口膜，用灭过菌的镊子取出1-2片滤纸片，直接投入摇瓶中培养；或者用少量生理盐水浸泡后，挑取菌液划线接种于平板培养。