真菌扫描电镜制样

发布日期：2020-07-26 15:32 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

1.取样
真菌样品为平板培养、植物或动物组织上。需要的样品应具备典型特征，可以先在光学显微镜观察的基础上取样，样品块可根据扫描电镜载物台大小尽量取大一些，但要防止样品块过大在后期处理中卷曲遮盖观察对象。
2.固定
2.5%戊二醛4℃度固定12h以上，磷酸缓冲液（或蒸馏水）漂洗3次。或者辅以后固定，方法为1%锇酸后固定1-2h，PBS（或蒸馏水）漂洗3次。
3.脱水
脱水采用逐级脱水，分别为30%、50%、70%、80%、90%乙醇各脱水1次，100%乙醇脱水3次，每次15min。脱水时间根据样品块大小可灵活掌握，脱水过程中注意保持样品块应始终浸润在溶液中。
4.干燥
（1）空气干燥
样品直接暴露于空气中，或借助烘箱（40℃）使脱水剂自然挥发。
（2）真空干燥
样品置于真空镀膜仪内（或真空干燥器、冷冻干燥器内），在镀膜仪抽低真空条件下，样品中的水分和脱水剂逐渐挥发。
（3）叔丁醇冷冻干燥（胡春辉, 徐青, 孙璇,等. 几种典型扫描电镜生物样本制备[J]. 湖北农业科学, 2016, 55(20):5389-5392.）
梯度乙醇脱水后的样品依次置于2:1→1:1→1:2乙醇:叔丁醇溶液中置换各1次，每次15min，再用100%叔丁醇置换3次，每次15min，最后1次置换后样品管中留存少量叔丁醇浸没样品块，冰箱中预冷（4℃）过夜后在冻干机中冻干（1-4 h）。
（4）醋酸异戊酯置换干燥（杨秉耀. 真菌的扫描电镜样品制备[J]. 分析测试学报, 1988, 000(003):33.）
梯度乙醇脱水后的样品用醋酸异戊酯置换3次，每次15min，最后1次置换后样品管中留存少量醋酸异戊酯溶液浸润样品块，将样品管放入真空干燥器中抽干（1-4 h）。
5.喷金