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真菌扫描电镜制样

发布日期:2020-07-26 15:32 来源:研究小组 作者:AgroIPM 浏览次数:
1.取样
      真菌样品为平板培养、植物或动物组织上。需要的样品应具备典型特征,可以先在光学显微镜观察的基础上取样,样品块可根据扫描电镜载物台大小尽量取大一些,但要防止样品块过大在后期处理中卷曲遮盖观察对象。
2.固定
      2.5%戊二醛4℃度固定12h以上,磷酸缓冲液(或蒸馏水)漂洗3次。或者辅以后固定,方法为1%锇酸后固定1-2h,PBS(或蒸馏水)漂洗3次。
3.脱水
      脱水采用逐级脱水,分别为30%、50%、70%、80%、90%乙醇各脱水1次,100%乙醇脱水3次,每次15min。脱水时间根据样品块大小可灵活掌握,脱水过程中注意保持样品块应始终浸润在溶液中
4.干燥
(1)空气干燥
      样品直接暴露于空气中,或借助烘箱(40℃)使脱水剂自然挥发。
(2)真空干燥
      样品置于真空镀膜仪内(或真空干燥器、冷冻干燥器内),在镀膜仪抽低真空条件下,样品中的水分和脱水剂逐渐挥发。
(3)叔丁醇冷冻干燥(
胡春辉, 徐青, 孙璇,等. 几种典型扫描电镜生物样本制备[J]. 湖北农业科学, 2016, 55(20):5389-5392.
      梯度乙醇脱水后的样品依次置于2:1→1:1
→1:2乙醇:叔丁醇溶液中置换各1次,每次15min,再用100%叔丁醇置换3次,每次15min,最后1次置换后样品管中留存少量叔丁醇浸没样品块,冰箱中预冷(4℃)过夜后在冻干机中冻干(1-4 h)。
(4)醋酸异戊酯置换干燥(杨秉耀. 真菌的扫描电镜样品制备[J]. 分析测试学报, 1988, 000(003):33.
        梯度乙醇脱水后的样品用醋酸异戊酯置换3次,每次15min,最后1次置换后样品管中留存少量醋酸异戊酯溶液浸润样品块,将样品管放入真空干燥器中抽干(1-4 h)。
5.喷金


微生物电镜样品制备文献

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