常用培养基的制作

发布日期：2019-01-08 16:16 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

1 PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养）Potato Dextrose Agar

用于大部分病原真菌的培养，为真菌培养通用培养基。
材料：土豆、葡萄糖、琼脂粉、水（自来水即可）
称取200 g马铃薯，洗净去皮切片，加水1000 mL煮沸15 min，纱布过滤后加水补足至1000 mL，再加12g葡萄糖和10～12 g琼脂粉，煮沸待琼脂粉完全熔化后分装。分装后的培养基应在1 h内灭菌，采用高压蒸汽湿热灭菌，在0.1 MPa蒸汽压下，温度达121 ℃，维持20 min。
分装方法：
A．三角瓶（锥形瓶）分装。采用250 mL容积的三角瓶分装，每瓶分装约200 mL培养基，瓶口覆透气灭菌封口膜，以棉线扎紧。
B．试管分装。试管分装制作斜面培养基，主要用于菌种的转接和保存。取20 mL的干净试管，加入培养基约5 mL（1/4试管高度），试管口用脱脂棉制作的棉花塞塞口，7根试管为一组，管口部分用报纸包裹，棉线扎紧。灭菌后应趁热取出，斜放在桌面制成斜面。
注意：试管分装时尽量避免培养基粘粘在管口部分，否则培养基可能粘住棉花塞或引起微生物污染，影响后续试验操作。

2 PD培养基（马铃薯葡萄糖培养基）Potato Dextrose
用于微生物的发酵培养。
材料：土豆、葡萄糖、水（自来水即可）
制作过程同PDA培养基，不同之处在于不添加琼脂粉，制作出的培养基在冷却后为液体状态。
分装方法：分装方法同PDA培养基。

3 CA培养基（胡萝卜琼脂培养基）Carrot Agar
用于一些特殊真菌的培养，如辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）的培养及产孢培养。
材料：胡萝卜、葡萄糖、琼脂、水（自来水即可）
制作方法同PDA培养基，仅将马铃薯更为胡萝卜。
分装方法：分装方法同PDA培养基。

4 OA培养基（燕麦片琼胶培养基）Oatmeal Agar
这种培养基培养真菌和放线菌，可促使某些真菌形成孢子或子实体，也适于保存腐霉属和疫霉属真菌的菌种。
材料：燕麦片、琼脂、水（自来水即可）
燕麦片30g加水1000mL，煮沸1h，用纱布过滤后补足水至1000mL，加琼脂粉10～12熔化后分装灭菌。琼脂加到15g，可用于较长时期的培养，可促使孢子产生。
分装方法：分装方法同PDA培养基。

5 NA培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）Beef Extract Peptone Medium
营养琼脂培养基，用于细菌的培养，如葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌等。
材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、自来水
依次准确地称取牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g放入烧杯中，加入少量水搅拌加热使之熔化，定容至1000 mL加入纯化琼脂粉12 g，继续搅拌加热使之熔化。pH值的调节使用1mol/L NaOH和1mol/L HCl进行调节。pH值控制在7.0-7.2之间。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
分装方法：分装方法同PDA培养基。

6 LB培养基（Luria-Bertani培养基）
生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增，达到使用要求。
LB培养基的配方如下：
胰蛋白胨(Tryptone) 10 g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5 g/L
氯化钠(NaCl) 10 g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E. coli的生长)用于细菌的培养，如葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌等。
   分装方法：分装方法同PDA培养基。

7 GYM培养基（葡萄糖酵母麦芽培养基）Glucose Yeast Malt
葡萄糖 4.0 g
酵母提取物 4.0 g
麦芽提取物 10.0 g
碳酸钙 2.0 g
琼脂 12.0 g
蒸馏水 1000.0 ml
在加入琼脂前，用氢氧化钾将pH值调整到7.2（使用 pH值试纸）。如果使用液体培养基，就去除碳酸钙。
分装方法：分装方法同PDA培养基。
Zotzel J, Keller P, Fuchsbauer H L. Transglutaminase from Streptomyces mobaraensis is activated by an endogenous metalloprotease[J]. European Journal of Biochemistry, 2003, 270(15): 3214-3222.

8   MEA培养基（麦芽膏琼脂培养基）Malt-extract Agar
Malt extract 20 g
Glucose 20 g
Peptone 1 g
Agar 15 g
蒸馏水 1000.0 ml
将PH值调整到4.6±0.2
分装方法：分装方法同PDA培养基。
该培养基也有直接使用Malt extract 50 g/L进行配制的，注意根据参考文献选用合适的培养基。

9 CMA培养基（玉米粉培养基）Corn meal Agar
Corn meal 20 g
Agar 15 g

10 GPYA培养基（葡萄糖蛋白胨酵母提取物培养基）Glucose peptone yeast extract agar
Glucose      20 g
Peptone     5 g
Yeast extract     5 g
Agar    15 g
Distilled water   1 L
Adjust pH to 5.0-5.2 and sterilize 30 minutes at 110℃. (0.5atm)

11 PCA培养基（马铃薯胡萝卜培养）Potato carrot agar
Scraped carrots　40 g
Peeled potatoes　40 g
Distilled water　1 L
Grind carrots in blender, cut potatoes in small pieces, boil for 15 minutes, filter through cloth. Sterilize 15 minutes at 121°C.

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