液相色谱延迟体积Dwell volume

发布日期：2023-04-15 20:46 来源：Waters 作者：Waters 浏览次数：

放大液相方法或更改液相分析系统时，延迟体积（即系统体积或死体积）对于维持早洗脱峰的峰分离度很重要。延迟体积是指梯度形成处到色谱柱柱头之间的体积。在高压混合LC系统中，该体积主要包括混合器、连接管路和自动进样器定量环的体积。低压混合系统包括来自泵的上游溶剂，因此这些额外的管路体积加上泵头（一个或多个）体积，再加上混合器、连接管路和自动进样器定量环的体积共同组成了总延迟体积。

导致延迟体积的纯化流路组件（用虚线圈出）

1. 取下色谱柱。

2. 以乙腈为流动相A，以含有添加剂（0.05 mg/mL尿嘧啶或0.2%丙酮）的乙腈为流动相B。

3. 将UV检测器波长设置为254 nm。

4. 计算两次延迟体积（即采用原仪器中的流速计算，以及采用目标仪器中的预期流速计算）。

5. 使用100%流动相A采集基线5 min。

6. 将梯级设置为5 min后变为100%流动相B，然后继续采集数据5 min。

7. 测定100%流动相A和100%流动相B之间的吸光度差值。

8. 测定该吸光度差值的50%处的时间。

9. 计算梯级起点与50%点之间的时间差值。

10. 将时间差值乘以流速。

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