HILIC模式色谱柱综合了液液分配、离子交换和氢键作用:
◐ 极性分子首先在主体流动相与色谱填料表面的半固定的高极性水膜之间发生液液分配
◐ 次级保留作用包括色谱填料表面硅醇基和/或极性官能团与带电分析物发生的离子交换作用
◐ 氢键作用发生在带正电的分析物与带负电的表面硅醇基之间
流动相选择/梯度设置请从高有机相起始,洗脱顺序由弱到强分别为:四氢呋喃,丙酮,乙腈,异丙醇,乙醇,甲醇,水。一般采用乙腈水为体系洗脱。
使用注意事项:
3.色谱柱的平衡、清洗与保存:
◐系统清洗溶剂
► 针强洗:1:9 乙腈:水
► 针弱洗/purge 溶液:初始流动相条件(不包括盐、添加剂、缓冲液)
◐新色谱柱活化
► 用50倍柱体积的50/50乙腈/水平衡(含有10 mM缓冲盐或者0.2%的添加剂)
◐色谱柱的平衡
► 初始流动相平衡20倍的柱体积
◐梯度分离
► 再平衡5-8倍柱体积流动相
◐色谱柱的保存
► BEH Amide 保存在100%乙腈
► BEH HILIC 保存在95%乙腈水
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