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HILIC亲水色谱柱的原理与维护

发布日期:2021-06-09 20:42 来源:研究小组 作者:AgroIPM 浏览次数:
HILIC亲水色谱柱适用于用于提高在反相色谱中保留弱的强极性化合物的分离分析。色谱柱采用强极性固定相,以高比例有机相/低比例水相为流动相实现洗脱。该种模式有利于提高电喷雾离子化质谱(ESI-MS)的灵敏度。

HILIC模式色谱柱综合了液液分配离子交换氢键作用
◐ 极性分子首先在主体流动相与色谱填料表面的半固定的高极性水膜之间发生液液分配
◐ 次级保留作用包括色谱填料表面硅醇基和/或极性官能团与带电分析物发生的离子交换作用
◐ 氢键作用发生在带正电的分析物与带负电的表面硅醇基之间

流动相选择/梯度设置请从高有机相起始,洗脱顺序由弱到强分别为:四氢呋喃,丙酮,乙腈,异丙醇,乙醇,甲醇,水。一般采用乙腈水为体系洗脱。

使用注意事项:

1.流动相添加剂:不推荐使用磷酸盐,推荐使用乙酸铵。
 
2.溶样溶剂:与反相色谱溶样溶剂不同,通用推荐为乙腈:甲醇(75:25 )
 

3.色谱柱的平衡、清洗与保存:

系统清洗溶剂

► 针强洗:1:9 乙腈:水

► 针弱洗/purge 溶液:初始流动相条件(不包括盐、添加剂、缓冲液)

新色谱柱活化

 用50倍柱体积的50/50乙腈/水平衡(含有10 mM缓冲盐或者0.2%的添加剂)

色谱柱的平衡

► 初始流动相平衡20倍的柱体积

梯度分离

 再平衡5-8倍柱体积流动相

色谱柱的保存 

► BEH Amide 保存在100%乙腈

► BEH HILIC 保存在95%乙腈水

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