链球菌菌种的保存

发布日期：2019-11-25 14:16 来源：研究小组作者：AgroIPM 浏览次数：

1 实验目的

　　用脱纤维羊血加肉浸液（3:1）做保护剂，制作链球菌的冻干菌种。

2 实验材料

2.1 实验仪器

　　超净无菌工作台
　　霉菌培养箱
　　灭菌锅
　　移液枪
　　冷冻真空干燥器
　　离心管（1.5 mL）、枪头（1 mL）、锥形瓶（50 mL）、烧杯

2.2 实验试剂

　　脱纤维羊血、牛肉膏粉、氯化钠、蛋白胨、磷酸氢二钾、蒸馏水。

2.3 供试细菌

　　肺炎链球菌（ATCC49619）
　　化脓性链球菌（ATCC19615）

3 保护剂的配制

　　肉浸液的配制：牛肉膏粉3.0 g、氯化钠5.0 g、蛋白胨10.0 g、磷酸氢二钾2.0 g，加入蒸馏水，定容至1000 mL。
　　保护剂的配制：脱纤维羊血与肉浸液（3:1）配制于锥形瓶中。

4 菌种培养

　　在无菌条件下打开菌株溶解液，取0.5 mL于到冷冻管中，轻轻振荡，使冻干菌株溶解成悬浮状，在血平板上划线培养。

5 实验操作

　　无菌条件下，从划线培养的血平板上取少量菌株于保护剂中，在37℃、二氧化碳环境中培养24 h。
　　将培养好的含有保护剂的菌悬液分装于已灭菌的离心管（1.5 mL）中，每个离心管装0.5 mL，密封，置于-45℃下预冻1 h，立即转入冷冻干燥器仓室，连续冷冻干燥14 h左右。从冻干机中取出后标记、密封后冷冻保存（-20℃）。

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