石蜡切片及染色过程

发布日期：2019-10-03 18:26 来源：未知作者：AgroIPM 浏览次数：

一、石蜡切片
1.取材:刀片要求锋利而薄,组织厚度约2-3mm,大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜.取材时间越快越好。
2. 固定:组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定。
注意：
(1) 固定液量应为组织块体积的40倍。
(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小,温度等有关.一般为3—24h。
(3) 固定温度大多可在室温固定,在低温(4℃)时间应延长。
(4) 固定容器应大些。
3. 漂洗:流水冲洗2-10h。
4. 脱水:从低浓度酒精到高浓度酒精。
70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’)。
5. 透明:组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂,而使石蜡进入组织块.常用二甲苯,一般浸泡30m即可。
6. 浸蜡:组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡.一般需经2—3次浸渍才能完成,总时间为3—4h.用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃。
7. 包埋:先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入.包埋面必须平整.包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固。
8.切片:修块→切片→展片→捞片→烤片。
二、HE染色
1. 染色前切片处理
(1) 脱福尔马林色素
(2) 脱汞盐结晶
(3) 脱黑色素
2.染色步骤二甲苯脱蜡(10’)→无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s-5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片。
3. 染色结果:细胞核呈兰色,胞浆呈红色。
三、盐酸酒精的配制
浓盐酸0.5是→1ml+75%酒精99ml。

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