几种特殊显微镜术

1．相差显微镜相差显微镜（phase contrast microscope）

　　是用于观察生活细胞或未经染色细胞的形态结构。生活细胞无色透明，细胞内各种结构间的反差很小，在一般光学显微镜下难以观察到细胞的轮廓及内部结构，必须使用相差显微镜。相差显微镜的结构特点是：①装有不同大小环状光阑的聚光器。②物镜内装有位相板。③中心望远镜装置。相差显微镜的基本原理是通过上述装置。把透过标本的可见光的相位差变成振幅差，从而提高了标本内各种结构之间的对比度，使标本中的结构清晰可辨。若观察生长在培养瓶中的生活细胞，则需应用倒置相差显微镜（inverted phase con- trast microsope）。它与相差显微镜基本相同，它的特点是物镜安装在载物台的下方，光源及长焦距聚光器安装在载物台的上方；可以对体外培养细胞进行长时间观察、拍照、摄电影及录像等以记录生活细胞的行为。

2．干涉微分相差显微镜 干涉微分相差显微镜（differntial interference phase con trast microscope)

　　基本原理与相差显微镜非常相似，但它有一装有分光器的聚光器，利用分光器将光束分为两组，一组光束通过被检物，另一束则通过周围介质，旋转检偏器，光的干涉形成光程差，可随旋转，两光束形成不同的角度，于是被检物呈现出不同颜色，致使生活细胞如同染上颜色一样，故又称为光染色。它与相差显微镜相比，除有鲜艳的颜色外，在细胞周围不出现明亮的晕环。

3．荧光显微镜（fluorescence microscope）

　　是用以观察细胞及组织内荧光物质的分布。它是装有、能产生紫外线（短波长）的光源及系列滤片装置的显微镜。由于紫外线的照射，标本中的荧光物质吸收光能后，呈现出不同颜色的荧光，这是自发荧光，如维生素A呈绿色荧光、心肌细胞内脂褐素呈棕黄色～金黄色荧光。但是,细胞内的某些成分只有与荧光素结合后，在紫外线的激发下，始可呈现一定颜色的荧光；如应吖啶橙（荧光素）处理细胞后，细胞核内的DNA呈绿～黄绿色荧光，细胞质及核仁内的RNA呈桔黄～桔红色荧光。利用荧光染色法及荧光显微镜可以观察组织、细胞的结构、细胞内某些成分含量的变化，并探讨细胞的功能状态。或用荧光素标记免疫球蛋白，进行免疫荧光细胞化学研究。

4．暗视野显微镜（dark field microscope）

　　特点是该显微镜具有暗视野聚光器，使光线不直接进人物镜，故呈暗视野。该显微镜适用于观察细胞内微小颗粒，例如线粒体、细菌运动等。

5．共焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscope，CLSM）

　　是80年代初研制成功的一种高光敏度、高分辨率的新型仪器。它的主要特点是：①以激光作为光源。②采用共焦成像系统． ③扫描、显示及记录系统。激光具有发散角小、方向性好的优点，光束通过聚焦后落在样品（如细胞等）的不同深度；在不同方向、不同深度的平面上进行聚焦扫描，从而得到一系列不同层次的清晰图像。平面间隔最小约600～800nm；利用微机图像合成系统可重建细胞的三维图像，可对细胞进行体视学的定量分析研究；CLSM可以更精确地检测、识别，组织或细胞内的微细结构及其变化。由此，CLSM又有细胞CT之称。