高效液相中的流动相乙腈与甲醇

1.紫外吸收
　　HPLC级溶剂，乙腈的吸光度在这两种溶剂中更低，适合低紫外光分析，特别是在低波长下的分析。甲醇在205-210nm左右有较高的紫外光吸收值，在该波长范围内有吸收的化合物不适用。

2.流动相溶解度
　　梯度洗脱重现性差的一个常见原因可能与运行高浓度缓冲液和高浓度有机溶液有关。含有浓度小于10mM盐溶液的水溶液/有机溶液在大多数梯度条件下不太可能沉淀（最多98%是有机溶剂，而不是100%)，而大多数与高效液相色谱应用一起使用的缓冲溶液会有更高的盐浓度，当分析条件中有机溶剂含量较高时可能会从溶液中析出（导致堵塞，泄漏，插头和不准确的结果）。在反向色谱法中确保使用的溶液在所有浓度下都是稳定的。

　　不确定盐是否会溶解?把同样浓度的溶剂混合起来测试是否产生浑浊或颗粒。

　　甲醇总体上具有更好的溶解度特性（优于乙腈），这意味着它在较高浓度下能更好地溶解大多数盐，从而获得更好的性能和更少的沉淀。

3.样品的溶解度(对峰形和保留的影响)
　　液相色谱的一个基本要求是样品完全溶解在流动相（初始流动相）中。在分析前，将样品溶解在流动相或强度稍弱的溶液（不是更强的溶液）。这确保它将作为一个集中的段塞加载到柱的顶部，以改善峰形和RSD。如果样品没有完全溶解在流动相，那么你实际上并没有分析整个样品。甲醇能完全溶解更多类型的样品，以获得更好的整体峰形。
　　永远不要假设一种溶剂会比另一种溶剂更好。必须首先分别尝试它们（乙腈&甲醇）在样品分析中的实际表现，再确定合适的流动相。

4.背压
　　乙腈的粘性比甲醇小，因此通常会导致整体柱压和系统背压降低。乙腈和水的混合物也会发生吸热反应（冷却溶液），从而在溶液中捕获气体。预先混合流动相，静置几分钟后再制备使用会获得更为理想的实验结果。
　　甲醇比乙腈更粘稠。甲醇和水的50/50混合物会产生一个比甲醇或水更高的系统和柱背压。两种溶液混合会释放出一些气体也会产生放热反应。预先混合溶剂并静置几分钟是较实用的方法。