Quantifying MAMP-induced Production of Reactive Oxygen Species in Sorghum and Maize

1. 材料准备
   取10 d玉米或15 d高粱第4片展开叶，用3 mm打孔器制2枚叶盘，浮于96孔黑板之50 µL水中，铝箔避光过夜。
2. 试剂配制（终体积50 µL/孔）
   玉米：1 µL 2 mg/mL L-012 + 1 µL 2 mg/mL辣根过氧化物酶 + 48 µL 20 mg/mL壳聚糖（或2 µM flg22）。
   高粱：0.5 µL L-012 + 0.5 µL酶 + 49 µL 100 mg/mL壳聚糖（或2 µM flg22）。
   mock孔不加MAMP。
3. ROS检测
   反应液加入后即刻置Synergy 2读板，每2 min测化学发光1次，连续1 h共31个点；积分31次光子计数并减去空白，再减mock得ROS爆发量。
4. 设计要点
   每系3技术重复+1 mock，整块板设4空白，可测23个基因型；≥2次生物学重复；低背景mock为质控标准。