常压反相柱层析

一、首先在柱子底下铺一层1cm厚的石英砂（也可不加）。

二、装入C18反相硅胶，甲醇润柱，活化硅胶，此步骤必不可少。或者将硅胶与甲醇混成匀浆后倒入柱子。

三、完全润湿硅胶后，上层留少量甲醇（液面与硅胶面齐平），轻轻敲击，使填料上层平整。

一般情况下，湿法上样就可以了，最好用水相体系溶解样品进行上样，如果溶解度不好，可以加入少量的有机相促溶。上样后，加入展开剂梯度洗脱，加入溶剂时不要将上层的沙子冲散。
注意事项：由于反相柱的压力比普通的正相柱大很多，整个操作过程要在通风橱中进行，并且加压时将通风橱拉低，安全第一。
梯度洗脱过程中，可以利用正相TLC监测反应，如果爬不起来可以尝试一下EA:AcOH=200:1体系。
 

六、柱层析结束后，利用甲醇冲洗柱子（直至硅胶层无色），下次备用。

常用的水相体系：0.1%TFA水溶液，0.1%碳酸氢铵水溶液。

有机相体系：乙腈，甲醇。

参考：C18 Reversed-Phase Silica Gel Flash Chromatography – A Visual Walkthrough；Jeffrey J. Jackson, Zakarian Group. UC Santa Barbara.