液体色谱中流动相梯度的筛选
发布日期：2022-03-08 11:54 浏览次数：
A：水相 B：有机相
1.样品预测试
常规样品初始设置方法时可以先参考以下初始条件运行：20分钟内，将有机相比例从5-10%线性升高至100%，并保持一段时间，确保所有组分被洗脱出来。
梯度结束后，有组分的洗脱时间超过梯度时间的25%，也就是该条件中如果有化合物在5分钟之后被洗脱出来，则说明保留强，需要考虑更换保留能力更弱的色谱柱或更换极性更强的有机溶剂。
梯度时间tG=20 min
首峰出现时间ti=12.8 min
末峰结果时间tf=21.2 min
ΔtG=tf-ti=21.2-12.8=8.4 min
ΔtG>0.25tG，使用梯度洗脱
ΔtG<0.25tG，使用等度洗脱
2.样品等度洗脱
tr(avg)=(ti+tf)/2=17 min
Δ%B/min=(%Bfinal-%Binitial)/tG=(100-5)/20=4.75%B/min
等度洗脱流动相比例在17 min=(Δ%B/min x tr(avg))+%Binitial=(4.75x17)+ 5=85.75≈86%B
该样品可以用等度洗脱，方法设置为：水相与有机相比例为14:86，保持17min。
3.样品梯度洗脱
梯度洗脱主要包括以下几个参数：初始流动相比例、结束流动相比例和流动相变化速率，同样以之前的样品为例：
Δ%B/min=(%Bfinal-%Binitial)/tG=(100-5)/20=4.75 %B/min
调整后的初始流动相比例
Optimized%Binitial
=(%Binitial+(tixΔ%B/min))-(V/FxΔ%B/min)-10%B
=(5+(12.786x4.75))-(5.5/2x4.75)-10
=42.67%B
调整后的结束流动相比例
Optimized%Bfinal
=(%Binitial+(tfxΔ%B/min))-(V/FxΔ%B/min)-10%B
=(5+(21.142x4.75))-(5.5/2x4.75)-10
=82.36%B
V为系统体积，F为流速。
通过计算得到调整后的初始流动相比例等于42.67%，调整后的结束流动相比例等于82.36%。
如果按照以上计算出来的条件，流动相从42%到83%，运行时间20min。
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