链球菌菌种的保存
发布日期：2019-11-25 14:16 浏览次数：479
1 实验目的
用脱纤维羊血加肉浸液（3:1）做保护剂，制作链球菌的冻干菌种。
2 实验材料
2.1 实验仪器
超净无菌工作台
霉菌培养箱
灭菌锅
移液枪
冷冻真空干燥器
离心管（1.5 mL）、枪头（1 mL）、锥形瓶（50 mL）、烧杯
2.2 实验试剂
脱纤维羊血、牛肉膏粉、氯化钠、蛋白胨、磷酸氢二钾、蒸馏水。
2.3 供试细菌
肺炎链球菌（ATCC49619）
化脓性链球菌（ATCC19615）
3 保护剂的配制
肉浸液的配制：牛肉膏粉3.0 g、氯化钠5.0 g、蛋白胨10.0 g、磷酸氢二钾2.0 g，加入蒸馏水，定容至1000 mL。
保护剂的配制：脱纤维羊血与肉浸液（3:1）配制于锥形瓶中。
4 菌种培养
在无菌条件下打开菌株溶解液，取0.5 mL于到冷冻管中，轻轻振荡，使冻干菌株溶解成悬浮状，在血平板上划线培养。
5 实验操作
无菌条件下，从划线培养的血平板上取少量菌株于保护剂中，在37℃、二氧化碳环境中培养24 h。
将培养好的含有保护剂的菌悬液分装于已灭菌的离心管（1.5 mL）中，每个离心管装0.5 mL，密封，置于-45℃下预冻1 h，立即转入冷冻干燥器仓室，连续冷冻干燥14 h左右。从冻干机中取出后标记、密封后冷冻保存（-20℃）。
