发布日期：2019-11-12 16:16 浏览次数：
1.制备谱图中峰的分叉原因和处理办法
峰分叉又称为裂峰，有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱本身受损发生了变化。
A、样品浓度较高，上样量较大，导致峰分叉；只需要减少上样量即可。
B、色谱柱柱头被污染引起的峰分叉；使用合适的溶剂冲洗色谱柱。
C、柱压太高致使柱头塌陷引起峰分叉；在柱头端增补填料或者更换新色谱柱。
D、溶解样品的强度比流动相强，溶剂效应引起峰分叉；使用流动相溶解样品即可。
E、固体颗粒堵塞分配器，分配不均匀导致峰分叉；更换柱头端分配器即可。
2.我要单次上样0.5-1g样品，请问我该用什么制备柱？
建议使用30*250mm或者50*250mm的制备柱。化学药可以按照每100g填料可以上样1g样品的方法进行简单的计算，得到应该使用多大的制备柱或者相应的填料量。多肽样品由于自身的特殊性，纯化同样质量的样品，需要更多的填料。一般认为多肽样品100g填料可以上样0.1g样品。
3.柱子流速和运行压力
正常情况下，21.2mm色谱柱的最佳流速20mL/min。制备柱流速可以参考下表：
| 规格 | 柱管规格（mm） | ||||
| 项目 | 4.6*250 | 10*250 | 21.2*250 | 30*250 | 50*250 |
|
填料量 （g） |
2.5 | 11.8 | 53.1 | 106.3 | 295.4 |
| 放大因子 | 1 | 4.73 | 21.2 | 42.5 | 118 |
|
上样量 （mg） |
0.25-25 | 1.18-118 | 5.31-531 | 10.63-1063 | 29.54-2954 |
|
流速范围 （ml/min） |
0.5-2 | 3-5 | 10-20 | 20-45 | 70-130 |
