发布日期:2011-10-26 16:20 浏览次数:
TLC的一个重要的作用就是为层析时选择合适的洗脱体系,和合适的洗脱比例。一般来讲,如果要将TLC中合适的洗脱比例用于柱层析时,一般应该适当减小洗脱强度,所以所谓降低30~50%,是有道理的。如何降低了,当然一般是调节洗脱液的比例,在使用TLC时,一般来讲,是很少用一元体系来展开,特别是对于成分较为复杂的化合物,几乎是不可能。
通常一个展开体系,包括由两部分组成。
第一部分:基本展开体系(包括极性大的试剂,极性较小的试剂。其中,极性较小的部分一般起到分离的作用,极性较大的试剂一般起到帮助化合物在薄层上移动,对分离物质的洗脱能力较强,可以提高比移植,但不能提高分辨率。
第二部分:展开剂中加入酸或碱,主要是抑止某些酸或碱性物质而产生斑点的拖尾。
因此,调节基本展开体系溶剂的比例就可以调节溶剂的极性,换言之,就是增大小的比例,或减小大的比例。
混合溶剂的溶剂强度与组成溶剂所占的体积比相关,可通过介电常数或其它常数来计算。柱层析时还是以配制后用TLC验证Rf值为好,分离斑点之间Rf值相差较大时,将Rf值调节在0.2左右,梯度洗脱;斑点相距较近或呈念珠状相连时,将主要斑点Rf值调至0.15至0.2之间为好。Rf值太小,柱上洗脱时间较长,谱带扩散较严重;Rf值太大,洗脱平衡不充分,也难于分开。斑点的洗脱体积与其Rf值有近似倒数的关系,Rf为0.1时,需10个保留体积来洗脱;Rf为0.3时,需3个保留体积洗脱;一般斑点在7或8个保留体积洗脱时(即Rf值在0.15至0.2之间),效果最好。
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