中草药活性成分的层析纯化新策略

植物活性成分各种层析纯化方法

经典活性组分的分离纯化

生物碱纯化平台 － <pH3的酸水提取 →阳离子交换 SP Sepharose HP → 中、高压硅胶反相
　　生物碱是来源于植物界的含氮有机化合物，很多都具有很强的生理、药理活性，为非常重要的中草药有效成分。生物碱的种类非常繁杂，以其来源或化学结构分类的方法亦有多种。常见的即包括吡咯类、哌啶类、吲哚类、咪唑类、奎宁类、苯并二氮卓类等。生物碱主要分布在高等植物中，一般是数种或数十种生物碱共存，而且往往来源于同一个前体，因此结构类似，含量低。由于生物碱带碱性，在传统的硅胶或氧化铝层析上效果往往不理想。建议用<pH3的酸水提取生物碱，直接上阳离子交换介质SP Sepharose HP，这种介质载量高，易于直接放大，对生物碱有特殊的选择性，可以从酸水粗提物中分离结构近似的十几种生物碱，一步到达60-80%的纯度(图一至四)，然后再上中、高压反相层析如SOURCE15RPC或C18硅胶可将纯度提高到90%以上。SOURCE 是(聚苯乙烯)为基架的反相介质，可耐受1M强酸强碱，比传统的如C8、C18硅胶反相介质使用范围更宽广，寿命更长。

有机酸－ >pH11的碱水提取 →阴离子交换 Q Sepharose HP或Sephadex LH20 → 中、高压硅胶反相
　　有机酸多与钾、钙、钠或生物碱结合成盐，亲水性强，广泛存在于植物中。有机酸也以游离的形式存在而发挥生理作用，例如：柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸（维生素C）、乳酸常被作为有机酸味剂，琥珀酸具抗抑郁活性。咖啡酸和阿魏酸为异构体，同时存在于川芎、升麻内；原儿茶酸和香草酸也是同分异构体，同时存在于是四季青中和香草内，是主要的抑菌成分。与生物碱相反，有机酸带负电荷，纯化建议用>pH12的碱水和醇提取有机酸，直接上阳离子交换介质Q Sepharose HP，一步纯度可达50%以上，然后再上（或直接上）Sephadex LH-20或反相层析将纯度提高到90%以上。

　　Sephadex LH-20由葡聚糖凝胶Sephadex G-25交联亲脂性羟丙基而制备，是同时具备吸附层析、分配色谱和分子筛功能的独特层析介质。由于它不受溶剂系统限制，可使用水、任何醇类、丙酮、乙酸乙脂、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯等各种溶剂，大量文献证明它非常适合中草药中含羟基、羧基的亲水成分如有机酸、甙类、黄酮、多酚等的纯化。透过筛选不同溶剂系统，Sephadex LH-20能有效分离这些物质中结构极近似的同分异构体。

黄酮、萘醌 － 水和醇提取 → Sephadex LH20 → 中、高压硅胶层析
　　植物黄酮为最常见的中草药有效成分之一，数量之多列天然酚类化合物之首。其生理作用是多种多样的。

　　Sephadex LH-20广泛地应用在黄酮类物质的分离纯化中，在《中草药》杂志上发表的文章基多。许多结构极为近似的黄酮及可根据所含羟基的数量、位置或氢键位置的不同，在Sephadex LH-20上得到很好的分离效果。总括来说黄酮所含羟基数量越多，与Sephadex LH-20介质所形成的氢键数量越多，结合越强。

多酚类 水和醇提取 → Sephadex LH20 → 中、高压硅胶层析
　　Sephadex LH-20近年被越来越多地应用于多酚的纯化、制备中。与黄酮纯化类似，多酚的纯化也可根据所含羟基、芳香环、双键的数量、位置，以及与Sephadex LH-20介质所形成的氢键的数量、强度的不同进行分离。总括来说多酚所含羟基、芳香环数量和所形成的氢键数量越多、越强，结合也越强，洗脱也较晚（如各种茶多酚、白藜芦醇的纯化）。

中草药活性成分的层析纯化新策略