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孢子染色法

时间:2017-05-19 19:19
来源:研究小组
作者:admin
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内容介绍

1 原理
    微生物生长型细胞及孢子经孔雀绿染色后呈绿色,经脱色剂蒸馏水清洗,蒸馏水只能去除过剩染料及生长型细胞上之染料(孔雀绿对生长型细胞亲和力低),芽孢经染色后就不能以蒸馏水脱色,经复染剂沙黄(Safranin Solution)染色,生长型细胞呈红色,芽孢呈绿色。

2 步骤
2.1 标本制作
    取一载玻片于火焰上加热以去除油脂,放冷后于载玻片上加一滴无菌水,以接种环取少量菌种于无菌水上并涂抹均匀(约0.7×0.7㎝),最后载玻片于火焰上略微加热至水分干燥(需晃动避免加热于固定一点),使细胞固定再进行细胞染色。
2.2 染色
2.2.1初染
    滴一至两滴孔雀绿染剂于经固定之菌体上,于火焰上加热一分钟(需晃动),使染液冒水蒸气3~4次,促使染液渗透进入芽孢内。
2.2.2脱色
    以蒸馏水或自来水清洗,但不能直接冲洗固定之菌体,宜以缓水流通过固定之菌体(约30秒),将过剩染剂去除,此时生长细胞呈无色。
2.2.3复染
    加数滴沙黄染液,放置约30~60秒后,以水缓缓冲洗再将菌体周围用纸吸干,菌体上方加上盖玻片(倾斜放下,避免产生气泡),四周溢出之水分以纸吸取。
2.3 镜检
    打开光源开关,将光源调至适当光度。接物镜选择×100之物镜,目镜×15(品二显微镜最高倍率)。于盖玻片上方滴一至二滴杉木油(或矿物油),使油呈水滴状,将载玻片固定于载物台上,移至载物台开孔中央。旋转粗调节轮使接物镜前端浸于油中,并尽可能使物镜与盖玻片接近(眼睛在旁观视),再反转细调节轮缓缓将载玻片移开,以求得最佳焦距。利用转物轴调整钮可使载玻片前后左右移动,可得到其他视野之物象。此时生长细胞呈红色,孢子呈绿色。

3 药品配置
    孔雀绿染液:孔雀绿(Malachite Green)5.0克溶于100ml蒸馏水。
    沙黄染液:沙黄(Safranin Solution)0.5克溶于100ml蒸馏水。

4 注意事项
    取菌种时确保菌落已产生孢子。镜检后物镜可先用拭镜纸将油(油镜)擦拭干净,再用拭镜纸沾酒精(或乙醚)擦拭几次,最后再以拭镜纸擦拭干净。

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